在线a免费观看网站

當前位置:首頁 > 行業動態 > /?液氮罐細胞冷凍原理是什么?

液氮罐細胞冷凍原理是什么?

時間:2021-01-25 14:45來源:未知 作者:班德液氮罐 點擊:

  細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于*下196℃液氮中低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞,可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,起到了細胞保種的作用。

  除此之外,還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養基中加入保護劑——終濃度5%~15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點降低,加之在緩慢凍結條件下,細胞內水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細胞損傷。標準冷凍速度開始為-1到-2℃/min,當溫度低于-25℃時可加速,到-80℃之后可直接投入液氮內(-196℃)。 目前常用的保護劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油,它們對細胞無毒性,分子量小,溶解度大,易穿透細胞。 實驗材料 儀器:液氮罐、凍存管(塑料螺口專用凍存管或安瓿瓶)、離心管、吸管、離心機等。 試劑:0.25%胰酶、培養基、含保護劑的培養基(即凍存液) 附:凍存液配制:培養基加入甘油或DSMO,使其終濃度達5-20%。保護劑的種類和用量視不同細胞而不同。配好后4℃下保存。

  實驗步驟

  1、消化細胞,將細胞懸液收集至離心管中。

  2、1000rpm離心10分鐘,棄上清液。

  3、沉淀加含保護液的培養,計數,調整至5×106/ml左右。

  4、將懸液分至凍存管中,每管1ml。

  5、將凍存管口封嚴。如用安瓿瓶則火焰封口,封口一定要嚴,否則復蘇時易出現爆裂。

  6、貼上標簽,寫明細胞種類,凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細繩。

  7、按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→低溫冰箱(-30℃1小時)→氣態氮(30分鐘)→液氮。

  注意:操作時應小心,以免液氮凍傷。液氮定期檢查,隨時補充,絕對不能揮發干凈,一般30立升的液氮能用1~1.5月。

相關內容

收縮
  • 電話咨詢

  • 15611258074
  • 微信咨詢
在线a免费观看网站